重组蛋白

       常用的重组蛋白表达宿主有细菌和真核表达系统。在真核生物的蛋白功能研究以及人类蛋白药物开发中,真核表达系统相对于细菌表达系统具有其明显的优势,诸如具有完整的蛋白折叠、组装和翻译后修饰[1,2]。真核表达系统中的中国仓鼠卵巢(CHO)细胞和人胚肾(HEK)细胞广泛应用于普通蛋白和治疗性重组蛋白药物研发和生产。
 
CHO细胞
       Chinese hamster ovary (CHO)细胞来源于中国仓鼠卵巢的上皮样细胞,根据不同的目的,已经发展出多种细胞系。目前对CHO细胞的研究比较深入,已经完成了对female Chinese hamster (Cricetulus griseus)、CHO-K1、DG44和 CHO-S的基因组测序[3-6]。另外,对CHO细胞的蛋白质组研究也在进行[7]。这些基础研究将极大促进其在科学研究和生物制药产业中的应用。
 
HEK细胞
       HEK 293细胞是在转染Adenovirus 5 DNA至正常的人类胚胎肾脏细胞中获得的[8],其包含Adenovirus 5 DNA的左端序列[9]。该细胞系的一个重要变种是293T细胞系,它包含SV40 Large T-antigen,可以对包含SV40复制起始点的质粒进行复制,这就允许对转染的质粒进行扩增,延长所期望的基因产物的表达时间[8, 11]。293FT是从293T细胞系中分离的、具有更高生长速率和转染效率的细胞克隆。用HEK293细胞表达和生产的重组蛋白尤其是糖蛋白,与人体内的蛋白在结构上尤其是糖基化结构上,是完全一样的。这种人源优势,对科研和生物制药项目,都具有重要意义。
 
      本公司拥有重组蛋白高效快速稳定表达系统,依托于研发团队开发的技术,可提高细胞的蛋白表达量和产率,同时明显缩短细胞稳定株的开发约一半的时间,同时可以提供标签切除、病毒失活、无血清悬浮培养等多种特殊要求。为客户提供灵活优质的服务。满足全球生物制药企业的药监申报要求。
 
重组蛋白真核表达系统技术平台的特色
  • 快速、highly-stringent筛选:只筛选到高表达稳定株;4~5个月获得稳定高表达细胞株(常规方法要9~12个月)
  • 高效表达:超强启动子和超强分泌信号肽,很容易达到30p/c/d/以上(传统方法需要用药物筛选9~11轮以上才能达到)
  • 稳定表达:表达质粒上的AGE稳定子,能够抑制染色体gene silencing,保障细胞株的长时间稳定表达
  • 用GS筛选:质粒上有谷氨酰胺合成酶(GS)基因,可以做为备选筛选标记,也可以直接用MSX加压筛选,显著提高重组蛋白的表达产率;
  • 高产率:单克隆细胞株在普通摇瓶里的蛋白表达量已能达到1.5~2克/升
  • 工艺放大优化潜力:经工艺放大优化(Process Development)后,蛋白产量可提高5-10倍以上。本表达系统可容易达到3~5克/升的蛋白的产量。极大地节约生产成本。
 
参考文献
[2]. Wurm FM. Production of recombinant protein therapeutics in cultivated mammalian cells. Nat Biotechnol. 2004 Nov;22(11):1393-8.
[4]. Xu et al. The genomic sequence of the Chinese hamster ovary (CHO)-K1 cell line. Nat Biotechnol. 2011 Jul 31;29(8):735-41.
[5]. Wurm FM, Hacker D. First CHO genome. Nat Biotechnol. 2011 Aug 5;29(8):718-20.
[6]. Lewis NE et al. Genomic landscapes of Chinese hamster ovary cell lines as revealed by the Cricetulus griseus draft genome. Nat Biotechnol. 2013 Aug;31(8):759-65.
[7]. Xu N et al. Comparative Proteomic Analysis of Three Chinese Hamster Ovary (CHO) Host Cells. Biochem Eng J. 2017 Aug 15;124:122-129.
[11]. Geisse S, Voedisch B. Transient expression technologies: past, present, and future. Methods Mol Biol. 2012;899:203-19.